一例UA假性降低引发的思考

发布时间:2019-01-30       作者:王力,王裔雄       来源:临床实验室        浏览:5558       收藏: 8

6月21日上午,在进修医院瑞金医院检验科,生化室陆怡德老师在审核报告的时候,发现一个病人的生化结果有异常,其TP达到124g/l,UA结果降低,为80μmol/l(见图1),这引起了老师的警惕。使用仪器为贝克曼AU5800,试剂为贝克曼原装试剂,UA检测使用的方法为尿酸酶-过氧化物酶偶联终点法。于是,我跟老师一起查看了标本,没有异常,查看反应曲线时发现了问题。这个标本的其他项目检测曲线均无异常,唯独UA的反应曲线出现了异常,且有G错误旗标(见图2),经验判断,这是严重的干扰。查询此病人的病历:患者,女,67岁,自述半个月无明显诱因出现头晕、腹痛不适症状,急化验发现患者白蛋白低、中度贫血,以“腹痛”收治入院。免疫检测结果,IgG768mg/dl,IgA334mg/dl,IgM7360↑mg/dl,轻链κ32.9↑g/l,轻链λ1.04↓g/l,诊断显示为巨球蛋白血症,怀疑引起UA反应异常的原因就是IgM型M蛋白。

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M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆恶性增殖所产生的一种大量的异常免疫球蛋白,因其多见于多发性骨髓瘤(multiple  myeloma)、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)及恶性淋巴瘤(malignant lymphoma),都是以M开头的疾病,故称为“M蛋白”。M蛋白可以是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD,也可以是κ或λ轻链中的任何一型。近年来,国内外已有多篇文献报道M蛋白干扰对临床生化检测的影响,涉及不同的方法和不同的检测项目。


找到了干扰的罪魁祸首,但是怎样才能消除这种干扰呢?于是我们想到了稀释,分别用生理盐水和去离子水来进行稀释,首先稀释五倍,稀释后,发现用生理盐水稀释的标本,样本依然是透明的,用去离子水稀释的样本发生了浑浊[1]。上机检测,反应曲线显示依旧是有干扰,会不会是稀释倍数低了?于是稀释10倍,结果还是有干扰,自此得出结论,仅稀释不能去除IgM型M蛋白对UA检测的干扰。过程中,我们对用去离子水稀释后,样本发生浑浊产生了兴趣,查阅相关资料文献,亲自做实验,发现用去离子水稀释标本发生浑浊的原因,可能是M蛋白水化膜遭到破坏,从而从水中析出。在UA的检测过程中发生的干扰是不是也是这种情况呢?AU5800的加样顺序为R1+样本+R2,反应曲线显示,在R1+样本之后,吸光度急剧上升,为此我们在机外做了实验,确实在R1和样本混合后,反应液有浑浊,这个情况与用去离子水稀释样本发生浑浊情况一样吗?答案应该是否定的,查阅相关资料文献,得出应该是UA R1试剂的PH值达到IgM蛋白的等电点,导致IgM析出产生浑浊。


到底该怎样消除IgM蛋白对UA检测的干扰呢?前面提到了用去离子水稀释标本后,标本变浑浊,说明有蛋白析出,那么如果把稀释后的标本,用高速离心机离心后,蛋白会不会沉淀呢?于是,继续做实验,选择了2个稀释倍数,2倍和5倍稀释,考虑到UA的线性范围,稀释倍数不能过大,否则会因为值过低而测不出结果。12000rpm离心5分钟后,观察,离心管下方都有白色沉淀物,上层透明,上机检测。稀释2倍的标本,反应曲线依然显示有干扰,稀释5倍的标本,反应曲线正常了,算上稀释倍数得到一个正常的结果,但是出现了G的旗标,提示值低于最低的动态范围。因为采取稀释的这份标本,IgM值为7360mg/dl,此次采取2倍稀释,再高速离心不能消除干扰,稀释5倍,虽然消除了干扰,但是又超出了最低动态范围。结论,此种方法可行,但是使用有局限性。


继续从资料文献中找答案吧。干化学法由于反应本身的优点,可以有效的去除M蛋白等大分子物质的干扰;通过预先混合R1和R2的方法来检测尿酸(贝克曼DXC800加样顺序)[2];PEG沉淀法和超滤法去除M蛋白干扰等[3]。这几种方法基层实验室难以实施。在IgM值不算太高,选择合适的稀释倍数,保证加样准确性的情况下,可以采取去离子水稀释后高速离心的方法。不同类型的M蛋白对不同方法、不同测试项目的干扰结果不一致,所采用的消除干扰方法也有所差异。综合评估M蛋白对常规检测项目可能存在的潜在影响,尽可能减少由M蛋白干扰引起的实验室误差以及由此造成的临床不良影响。


最后分享下引起UA检测结果降低的几个因素:

1、降尿酸药物的影响。苯溴马隆、别嘌醇等药物可以使体内UA降低。近几年出现了一种叫拉布立酶(注射液)的降UA药物,口服药名为非布司他,为重组尿酸氧化酶,可以用于治疗和预防具有高危肿瘤溶解综合征的血液恶性肿瘤病人的急性高尿酸血症,尤其适用于化疗引起的高尿酸血症病人。此药物对尿酸酶-过氧化物酶偶联法测定UA有影响。


2、高浓度维生素C的标本,可使测定结果偏低。尿酸酶-过氧化物酶偶联法反应体系中,有H2O2产生,维生素C具有还原性,可以消耗反应过程中产生的H2O2而使检测结果降低。CREA检测的肌氨酸氧化酶法、CHOL检测的酶法(COD-PAP法)、TG检测的酶法都受此影响。


3、就是本文提到的IgM型M蛋白的对反应过程的影响。


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参考文献:

[1] 何静,王治伟,胡远明。IgM型M蛋白干扰对临床生化检测

的影响[J]. 中国医药指南,2013,11(15): 432-433,437.

[2] 张栋梁,王跃荣,丁钱超。BECKMAN-COULTER AU5800生化

分析仪检测2例尿酸结果假性偏低的排除与浅析[J]. 检验医学,2016,31(2): 128-130.

[3] 李鹏昌,程歆琦,苏薇,等。高单克隆IgG对无机磷检测干

扰的解除[J]. 临床检验杂志,2016,34(6): 477-478.

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